产品货号：
SN0056
中文名称：
探针法荧光定量PCR预混液
英文名称：
2×BB Probe qPCR Mix
产品规格：
5mL
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
简要说明：
产品特点：
产品组成：
保存：-20℃，避光，有效期1年。
注意事项：
使用方法：
常见问题：
相关搜索：探针法荧光定量PCR预混液，2×BB Probe qPCR Mix
本制品是采用探针法进行qPCR反应的专用试剂，产品中包含抗体修饰的新型热启动BB AntiQ DNA polymerase和精心优化的Buffer，能有效抑制低温下的非特异性扩增，大大提高了反应特异性和扩增效率，能够在更宽广的范围内对靶基因进行准确定量。此外，本制品含有独特的校正染料，与一系列qPCR仪器兼容，包括需要ROX校正的仪器，实验过程中无需额外添加染料来校正仪器。
产品特点：
- 高特异性：采用抗体修饰的新型热启动BB AntiQ DNA polymerase和精心优化的Buffer。
- 操作简便：2×预混液中包含有qPCR反应所需所有组分，只需加入模板、引物、探针和水即可进行反应。
产品组成：
| 组分 | 规格 |
| 2×BB Probe qPCR Mix | 1mL×5 |
| 说明书 | 1份 |
保存：-20℃，避光，有效期1年。
注意事项：
- 使用前请充分溶解混匀，尽量避免反复冻融，以免酶活下降。
- 为了避免气溶胶污染，建议使用实验环境核酸清洁剂对实验台面及操作环境进行清洁。
- 为不影响后续实验，建议做预实验检查引物有效性和特异性。
- 上机前，注意消除体系中的气泡，以免对结果造成影响。
使用方法：
- 按下表在冰上配制qPCR反应体系
成分 用量 终浓度 2×BB Probe qPCR Mix 10μL 1× 引物1(10μM) 0.8μL 0.4μM 引物2(10μM) 0.8μL 0.4μM 探针 根据需要 - 模板DNA 根据需要 - ddH2O 至20μL - - 引物终浓度推荐0.4μM，当反应性能较差时，可在终浓度0.2～1.0μM范围内调整引物浓度。
- 探针终浓度可以在0.1μM～0.5μM之间调整。
- 不同种类的DNA模板中含有的靶基因拷贝数不同，必要时先梯度稀释再进行qPCR反应。若模板为cDNA原液，则使用体积不超过qPCR反应总体积的1/10，即2μL/20μL体系。
- 引物终浓度推荐0.4μM，当反应性能较差时，可在终浓度0.2～1.0μM范围内调整引物浓度。
- 推荐的qPCR程序
步骤 温度 时间 循环数 预变性 95℃ 2～5min 1 变性 95℃ 10s 40 退火/延伸 60～65℃ 20～50s - cDNA模板预变性2min，基因组DNA模板预变性5min。
- 2个以上的多重探针检测建议将退火延伸时间延长至50s。
- cDNA模板预变性2min，基因组DNA模板预变性5min。
常见问题：
- 无Ct值出现？
- 采集荧光信号的步骤有误。检查程序设置，两步法扩增在退火延伸步骤采集信号，三步法扩增在延伸阶段采集信号。
- 模板或ROX使用错误。当ROX浓度太低或太高时，Ct值可能显示为Unknown或空白，根据仪器类型选择合适的ROX。
- 引物或模板降解。PAGE电泳检测引物完整性，琼脂糖凝胶电泳检测模板DNA或RNA的质量及完整性，RNA模板建议重新逆转录获得cDNA，cDNA应尽快使用。
- 模板量不足。适当增加模板用量或重新制备高浓度模板。
- 采集荧光信号的步骤有误。检查程序设置，两步法扩增在退火延伸步骤采集信号，三步法扩增在延伸阶段采集信号。
- 实验重复性差？
- 加样存在误差。使用性能较好的移液枪，配制预混液后分装，减少移液误差。
- 荧光定量PCR仪器不同位置温度控制不一致。定期校准仪器。
- 模板浓度低或拷贝数低。适当增加模板用量。
- 加样存在误差。使用性能较好的移液枪，配制预混液后分装，减少移液误差。
- 扩增曲线形状异常？
- 扩增曲线不光滑。信号太弱，经系统矫正后产生，可提高模板浓度重复实验。
- 扩增曲线断裂、骤降。模板浓度较高或反应管内留有气泡，减小基线终点(CT值-4)重新分析数据，或上机前离心并仔细检查反应管内是否有气泡残留。
- 分析数据时通道选择不正确。如没有在体系中加入ROX，但分析时在仪器设置中选择了ROX选项，应根据具体操作体系选择合适的分析条件。
- 扩增曲线不光滑。信号太弱，经系统矫正后产生，可提高模板浓度重复实验。
- 同一试剂在不同仪器上产生不同的曲线？
分析扩增效率，灵敏度，特异性，如果扩增效率在90%～110%，且都是特异性扩增，则数据均可分析使用。
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